SKU：DR3000-HRSH-Sce类别：细胞背景 DNA 修复、同源重组报告细胞标签：DNA 修复、同源重组、HR DNA 报告基因描述套件内容运输和存储资源

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DNA修复动物细胞中的通路可分为两大类：HR 和 NHEJ。 HR 或同源重组是一条次要途径，但对于保护细胞免受基因毒性非常重要。 HR需要同源序列并且仅限于S期。基于特定报告基因的 HR 测定对于药物发现项目非常有益，可以更多地了解 DNA HR 修复过程并建立交叉途径和可药物途径目标。

这是第一个已被证实的 HR 报告基因。被设计成神经元衍生的细胞系。 SH-SY5Y 细胞系 (SH) 是从骨髓活检中分离出的亚克隆1973 年，一位患有神经母细胞瘤的 4 岁女性患者。最初的 SK-N-SH 细胞系是上皮细胞和神经元前体细胞的混合物。当前的细胞系是原始细胞系的第三个亚克隆，主要显示神经元表型标记。由于已知神经元标记物的表达，例如多巴胺 b-羟化酶活性、乙酰胆碱能、谷氨酸能和腺苷能活性，细胞在表型上被认为是神经元。在培养中，SH 细胞系仍然是 2 种不同表型的混合物。这些细胞可以通过神经营养因子的处理来强制分化。用于分化 SH 细胞的因子包括视黄酸 (RA)、脑源性神经营养因子 (BDNF) 和组织纤溶酶激活剂 (TPA)。神经营养因子治疗可诱导培养的 SH 细胞出现更多的神经元表型，包括树突化、神经元标记物产生的上调（见上文）以及从有丝分裂细胞向有丝分裂细胞的转变。st-有丝分裂，一旦分化开始。通常，SH 细胞可以在具有诱导因子的正常培养皿中分化，然而，用底物（例如聚-D-赖氨酸、胶原蛋白或层粘连蛋白）处理培养皿可用于促进分化过程。一旦分化，SH 细胞就不能再分化回分裂细胞群。因此，HR 分析可以在未分化和分化的神经元细胞中进行。

在 HR（有时称为基因转换）中，与 DSB 两侧同源的供体 DNA 序列提供遗传信息来修复休息。同源序列被复制到断裂的基因座中，使修复的基因座成为供体序列的精确副本，而不改变供体序列（图 1）。

基于细胞/细胞背景系统已设计用于允许研究人员检查和询问活 SH 细胞中的 HR 过程。 HR 套件使用双 GFP 盒，可将 GFP neg 转换为使用同源重组 (HR) 对 GFP 阳性细胞产生活性。由于野生型（同源）GFP 片段紧邻 DNA 断裂，因此会通过 HR（如基因转换）进行 DNA 修复。为了实现精确的 DNA 切割，大型核酸内切酶 (I-Sce1) 在 Cassette 1 的 GFP 基因座中引入 DS 断裂（图 1）。值得注意的是，人类基因组不包含 I-Sce1 位点；因此，盒 1 中的 I-Sce1 位点意味着 DS 断裂仅发生在该精确位置，而不发生在基因组的其他位置。 DS 断裂启动 HR，并使用 WT 序列作为同源模板（位于盒 2 中），基因转换为 WT，并出现 GFP 阳性细胞（图 2）。 HR 由 DS 断裂触发，DS 断裂是通过用 I-Sce1 表达质粒转染细胞来实现的（图 2）。通过用 pSCE1 转染可以轻松地在 SH 细胞中诱导 HR，结果如图 3 所示。通常，大约 5-10% 的细胞会在短时间内转化为 GFP+。转染后48-72小时。

图。 3   SH 细胞中的 HR

虽然该过程比其他细胞系（例如 Hela）中的过程稍慢，但它允许有足够的时间来区分细胞并分析它们之后的事件。停止分裂。更重要的是，这些 GFP+ 细胞可以在分化期间和分化后进行实时成像跟踪和跟踪。任何 GFP+ 后代都可以使用延时成像类似地追踪到未来。 You Tube 视频显示实时成像数据。

客户可以要求接收准备培养的报告细胞系（在环境温度下运输）。细胞在接种前可在 4°C 下保存不超过 1 周。其他试剂应在收到后储存在 4°C（短期）或 -20°C（长期）下。客户还可以要求冷冻细胞，这些细胞必须放置在超低温冰箱（-80°C）或液氮储存中，直到可以使用为止。

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